敷贴类产品生物相容性检测报告怎么做

参照GB/T16886《医疗器械生物学评价标准》的要求，对硅凝胶瘢痕贴进行细胞毒性试验、皮肤刺激试验和迟发型超敏反应试验。

医用硅胶作为一种高分子有机化合物，有着较好的物理和化学稳定性。为了系统评估硅凝胶瘢痕贴的生物相容性，本研究按照GB/T16886《医疗器械生物学评价标准》的要求，对硅凝胶瘢痕贴生物相容性进行安全性评价。

1 材料与方法

1.1  材料

小鼠成纤维细胞L-929（ATCC），胎牛血清（Gibco），胰蛋白酶（Gibco），MTT（美国Sigma公司），MEM（Gibco），完全弗氏佐剂（美国Sigma公司），成年新西兰兔（华兰生物疫苗有限公司，合格证号：41001700005019），体重2.2~2.7kg，健康初成年白化豚鼠（华兰生物疫苗有限公司，合格证号：41001700005096），体重300~500g。

1.2  方法

1.2.1  体外细胞毒性试验

无菌条件下取样品，按照1.25cm2/ml的浸提比例制备样品浸提液。将处于对数生长期的L-929细胞用胰酶消化后，加入细胞培养液，调整细胞浓度为1×104个/ml。将配置好的细胞悬液接种于96孔板中，每孔100μl。置5%CO2培养箱37℃，培养24h后，弃去原培养液。空白对照组加入新鲜MEM细胞培养液，供试品组加入样品浸提液，阴性对照组加入高密度聚乙烯浸提液，阳性对照组加入含5%二甲基亚砜的培养液，每孔100μl，置CO2培养箱继续培养72h。更换培养液72h后，将上述各组置于显微镜下观察细胞形态，并在每孔加入5g/L的MTT溶液20μl。继续培养4h后弃去孔内液体，加入150μl的DMSO，振荡10min后，在570nm和630nm波长下用酶标仪测定吸光度，并计算相对增殖率=试验组吸光值/空白对照组吸光值×[3]。按表1进行分级标准判定。

1.2.2  皮肤刺激试验

取新西兰兔3只，于试验前12h，剃除家兔背部脊柱两侧被毛，将其平均划分为4个试验区域，其中左上和右下为试验部位，左下和右上为对照部位。将样品裁剪成2.5cm×2.5cm大小，直接贴敷于试验部位。对照部位放置相同大小的纱布块。绷带封闭固定4h后去除。并在去除固定后1、24、48、72h观察皮肤红斑和水肿反应。样品的原发性刺激记分是将每只动物在每一规定时间试验材料引起的红斑与水肿的原发性刺激记分相加后再除以观察总数之和计算得出的。而样品的原发性刺激指数是试验样品原发性刺激记分与对照的原发性刺激记分之差[4]。 

1.2.3  迟发型超敏反应试验

取豚鼠15只，分为试验组10只和对照组5只，于试验前12h剃除动物左上背被毛。将样品裁剪成2.5cm×2.5cm大小，直接贴敷于试验部位并用绷带固定。对照组使用相同大小的纱布，并固定。6h后，去除包扎。1周中连续3d重复此步骤，连续3周。后一次诱导敷贴14d后，去除豚鼠右上背被毛，将样品贴敷6h后去除。对照组使用纱布做相同操作。于去除敷贴后24，48h观察皮肤致敏反应情况，并评级[4]。